【出 处】：

【作 者】：

【摘 要】目的构建针对HER2基因RNA干扰的真核表达载体并筛选出HER2基因的高效RNA干扰序列。方法采用化学合成方法合成三段针对HER2基因的shRNA,通过酶切连接方法与真核表达载体pSuper/GFP/neo相连接,构建针对HER2基因的RNA干扰载体,并通过酶切和测序方法鉴定是否含有设计的shRNA。应用脂质体转染试剂分别转染载体到人乳腺癌SK-BR-3细胞中,采用实时定量PCR和Western印迹检测其对HER2基因沉默的效果。结果 EcoRⅠ和HindⅢ进行双酶切鉴定,281 bp条带出现,证明质粒中插入外源基因,再经测序证实含有设计的shRNA序列。实时定量PCR和Western印迹结果显示3段shRNA均可降低HER2 mRNA的水平并且降低跨膜蛋白HER2的表达,其中shRNA2的HER2 mR-NA抑制效率最高,达到89%。结论构建了3个真核表达载体pSuper/GFP/neo-HER2,并筛选出shRNA2这段序列,可以有效沉默人乳腺癌细胞系SK-BR-3的HER2基因,为乳腺癌的HER2基因沉默靶向治疗奠定了基础。